關于夏至草失血性休克及淋巴微循環藥理學作用的研討論文
編者按：本文主要從材料與儀器；方法；結果；討論進行論述。其中，主要包括：淋巴循環是循環系統的重要組成部分、夏至草具有利水消腫、活血化淤作用、動物與分組、藥品與儀器、制備夏至草醇提物，經水煎醇沉，再經活性炭脫色、滅菌制成原生藥含量為5g·ml-1的注射液、失血性休克模型的復制及液體復蘇、組織勻漿標本的制備行液體復蘇后（或相當）3h，分別處死動物、組織勻漿MDA,SOD測定應用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法測定各臟器組織勻漿MDA含量、統計學處理所有數據、夏至草醇提物對失血性休克大鼠各器官組織勻漿MDA含量的影響、夏至草醇提物對失血性休克大鼠各器官組織勻漿SOD活性的影響、從改善微循環障礙以及血液流變性異常來尋找藥物和其他有效措施正成為醫學研究的重要課題之一等，具體請詳見。
摘要：目的觀察夏至草醇提物對失血性休克大鼠多器官自由基損傷的影響。方法Wistar雄性大鼠18只，隨機分為夏至草組、模型組和對照組（均n=6）。夏至草組和模型組復制失血性休克模型，維持90min，對照組僅手術。夏至草組自頸靜脈緩慢推注夏至草醇提物（5g/ml，6g/kg·bw），其它兩組以等量生理鹽水代替。40min后，制備肝、腎、心肌、肺組織勻漿，觀察組織勻漿自由基指標的變化。結果與對照組相比，模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿MDA含量顯著升高，SOD活性降低；夏至草組各器官組織勻漿MDA含量顯著低于模型組，SOD活性升高，除心肌組織勻漿SOD活性低于對照組外，其它各指標與對照組均無統計學意義。結論夏至草醇提物能明顯減輕大鼠重癥失血性休克后各器官的自由基損傷。
關鍵詞：夏至草失血性休克器官自由基
淋巴循環是循環系統的重要組成部分，近年來，淋巴循環維持機體穩態和疾病中的作用逐漸受到重視［1］。失血性休克（hemorrhagicshock）致組織微循環低灌注是引起肺、心、腎、肝等多個器官的功能障礙、誘發多器官功能障礙綜合征（multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS）的主要因素之一。我室研究表明，淋巴微循環與休克的發生、發展及轉歸關系密切［2］，良好的淋巴微循環有利于休克的代償，淋巴微循環障礙可促進休克的惡化［3］。夏至草具有利水消腫、活血化淤作用［4］，夏至草醇提物可明顯改善大鼠的淋巴微循環障礙［5］。本研究觀察了夏至草醇提物對失血性休克大鼠多器官自由基損傷的影響，旨在闡明夏至草對失血性休克以及淋巴微循環的藥理學作用。
1材料與儀器
1.1動物與分組
18只健康清潔級Wistar雄性大鼠（中國醫科院實驗動物繁育中心提供），體質量220～300g。隨機均分為3組（均n=6）：對照組（僅行手術）、模型組（復制失血性休克模型，輸血加生理鹽水進行治療）、夏至草組（復制失血性休克模型，輸血加夏至草醇提物進行治療，MI）。實驗前大鼠禁食12h，自由飲水。
1.2藥品與儀器
唇形科夏至草屬植物夏至草MrrubiumincisumBenth的全草（內蒙古駐張家口醫藥站提供，經河北北方學院中醫系姜希強教授鑒定），按文獻［6］報道方法，制備夏至草醇提物，經水煎醇沉，再經活性炭脫色、滅菌制成原生藥含量為5g·ml-1的注射液（pH、澄清度、溶血實驗檢測均為合格）；戊巴比妥鈉（北京化學試劑廠生產，批號20000919）；肝素鈉（北京奧博星生物技術責任有限公司生產，批號001218），FJ-200型高速分散均質機（上海標本模具廠），自動抽注機（浙江大學醫學儀器廠）。
2方法
2.1失血性休克模型的復制及液體復蘇所有大鼠肌注質量分數2％的戊巴比妥鈉（50mg/kg）全身麻醉，無菌手術，行右側頸總動脈和左側頸靜脈插管，備放血及輸液用。舌靜脈注射質量分數0.5%肝素（1ml/kg，700U/ml），全身抗凝。穩定10min后，經自動抽注機自頸總動脈緩慢放血（失血量以全血量的1/5計，全血量以體重1/13計），3min完成，保留備回輸用。以無菌林格式液瓶作為Lamson瓶，連接無菌輸液器，將液面調整至固定高度，維持低血壓（40mmHg）90min，復制大鼠重癥失血性休克模型［7］。然后，模型組、夏至草組以自動推注機自左側頸靜脈緩慢回輸放出之血液；輸血完畢后，夏至草組輸入6g·kg-1劑量（生藥）的夏至草醇提物（輸前用生理鹽水等倍稀釋），模型組輸入等量的生理鹽水。對照組僅麻醉及頸部手術，不放血及輸液復蘇。
2.2組織勻漿標本的制備行液體復蘇后（或相當）3h，分別處死動物。選擇固定的肝、腎、心、肺組織各0.8～1.0g，加9倍的4℃無菌生理鹽水，應用FJ-200型高速分散均質機低溫制備10%組織勻漿，應用高速低溫離心機以2500r/min離心10min（離心半徑8cm），取上清液置于-26℃冰箱內。
2.3組織勻漿MDA,SOD測定應用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法測定各臟器組織勻漿MDA含量、黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性（試劑盒購自南京建成生物工程研究所），嚴格按照試劑盒說明書要求進行操作。組織勻漿蛋白以考馬斯亮藍法進行定量。
2.4統計學處理所有數據以±s表示，經SPSS11.0統計軟件包進行單因素方差分析，兩組間比較用兩樣本均數t檢驗，P<0.05為具有顯著性差異。
3結果
3.1夏至草醇提物對失血性休克大鼠各器官組織勻漿MDA含量的影響模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿MDA含量均顯著高于夏至草組和對照組（P<0.01），而夏至草組肝、肺組織勻漿mda含量與對照組比較無統計學意義（p>0.05）。見表1。
3.2夏至草醇提物對失血性休克大鼠各器官組織勻漿SOD活性的影響模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿SOD活性均顯著低于對照組（P<0.01）；夏至草組除腎勻漿SOD活性低于對照組外（P<0.05），肝、心肌、肺組織勻漿sod活性與對照組均無統計學差異（p>0.05），且各器官組織勻漿SOD活性高于模型組（P<0.01）。見表2。表1夏至草醇提物對休克大鼠各器官組織勻漿MDA含量的影響（略）表2夏至草醇提物對休克大鼠各器官組織勻漿SOD活性的影響（略）
4討論
失血性休克是臨床急癥，微循環障礙以及凝血功能紊亂是引起大鼠肺、腎、肝等多個器官的功能障礙、誘發多器官功能障礙綜合征（multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS）的主要因素之一［1］。因此，從改善微循環障礙以及血液流變性異常來尋找藥物和其他有效措施正成為醫學研究的重要課題之一。夏至草具有利水消腫、活血化淤作用［6］，前期工作研究表明［5］，靜脈推注不同劑量的夏至草醇提物可改善大鼠的淋巴微循環障礙，增強腸系膜淋巴管收縮頻率及幅度，腸淋巴流量、蛋白輸出量明顯升高，該作用在6g/kg劑量時最顯著，1g/kg劑量則對淋巴循環未發生影響，在一定范圍內呈劑量效應關系。為此，本研究選擇了應用6g/kg的'劑量，從自由基損傷角度觀察夏至草醇提物對急性微循環障礙大鼠器官損傷的影響，闡明夏至草的藥理學作用，并為器官損傷的藥物治療提供實驗依據。
自由基損傷在細胞損傷乃至器官功能障礙的發病學中具有重要作用［8］。研究結果表明，大鼠重癥失血性休克后，模型組肝、腎、心肌、肺組織勻漿自由基的代謝產物MDA含量均顯著升高，具有清除自由基功能的SOD活性降低，結果提示失血性休克在引起大鼠急性微循環障礙的同時，加重了組織細胞的缺氧以及酸性產物潴留，加速了自由基的生成，這是引起自由基產生和釋放的重要原因［9］，表現在各臟器組織勻漿的自由基產物MDA含量增多，也加速了SOD的消耗；而過多的氧自由基進一步激活補體，補體系統被激活，補體活化產物（C3a，C3b，C5a等）可以刺激巨噬細胞和中性粒細胞釋放細胞因子和氧自由基，后者進一步通過膜脂質過氧化作用攻擊內皮細胞而加重損傷，形成細胞損傷的惡性循環。輸入夏至草醇提物后，各臟器組織勻漿MDA的含量均顯著低于模型組，SOD活性升高，結果提示輸入夏至草醇提物有效地減輕了失血性休克大鼠各重要器官的自由基損傷，這主要是由于夏至草醇提物具有良好的改善微循環作用，減輕了休克時大鼠的急性微循環障礙，從而緩解了細胞的缺氧狀態，抑制了自由基釋放，使機體自由基的產生與清除趨于平衡，減輕自由基對組織細胞的損傷作用，最終達到了保護器官功能的作用。
綜上所述，夏至草醇提物對失血性休克障礙大鼠具有較好的保護作用，其機制與夏至草醇提物有效改善微循環流態［10，11］、改善細胞缺氧狀態，從而減輕組織細胞的自由基損傷有關，這為深入研究夏至草醇提物的藥理學作用提供了實驗依據。以活血化淤類中藥為靶標，可為微循環障礙類疾病的治療開辟新途徑。
【參考文獻】
［1］F塴diM.LymphologyinthesecondMillennium［J］.Lymphology,2001,34(1):12.
［2］張靜,姜華,薄愛華.失血性休克時淋巴微循環的變化［J］.中華醫學雜志,1991,71(1):24.
［3］牛春雨,張靜,穆錚,等.不同轉歸的過敏性休克大鼠淋巴微循環的變化［J］.中國病理生理雜志,1997,13(6):620.
［4］李佳,陳玉婷.夏至草文獻考證［J］.中華醫史雜志,2001,31(2):113.
［5］牛春雨,李繼承,劉艷凱,等.夏至草醇提物對大鼠淋巴循環作用的實驗研究［J］.中國藥學雜志,2006,41(12):914.
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