談乳絡(luò)通膠囊的鎮(zhèn)痛抗炎及改善微循環(huán)作用的論文
中醫(yī)認(rèn)為乳腺增生主要為肝郁氣滯，痰瘀瘟結(jié)于經(jīng)絡(luò)，從而形成" 乳癖" ，相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的乳房纖維性瘤，乳腺囊性，臨床癥狀主要為乳房出現(xiàn)腫塊，疼痛等。乳絡(luò)通主要有香附、丹參、柴胡、白芍、栝樓、路路通6 味藥組成，本文采用急慢性炎癥動物模型和疼痛模型評價了乳絡(luò)通的抗炎、鎮(zhèn)痛及改善微循環(huán)作用，旨在為其治療乳腺增生提供藥效學(xué)依據(jù)。
1 材料和方法
1. 1 試驗藥物乳絡(luò)通膠囊( 乳絡(luò)通) ，由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室提供，批號050901，規(guī)格: 0. 2g /粒，用量: 每次3～ 4 粒，每天3 次。乳康片，由安康正大制藥有限公司提供，批號: 20050518，規(guī)格: 0. 35g × 24 片，用量: 一次3 片，一日3 次。
1. 2 動物大鼠，Wistar，雌性，清潔級，由河南省實驗動物中心提供，合格證號: 0001640。小鼠，昆明種，雌性，清潔級，由河北省實驗動物中心提供，合格證號: DK0509096。
1. 3 試劑硫化鈉，由天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心提供，批號: 2003021-16，規(guī)格: 500g。
1. 4 儀器BZ-2000 微循環(huán)觀察系統(tǒng)，由成都泰盟電子有限公司提供。FA( N) /JA( N) 系列電子天平，由上海民橋精密儀器有限公司提供。YLS-6A 智能熱板儀，由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站提供。
1. 5 方法
1. 5. 1 乳絡(luò)通對熱板法致痛小鼠的影響取18 ～ 20g 的清潔級昆明種雌性小鼠，用智能熱板儀( 56℃) 測定它們的初始痛閾值，以小鼠舔后足跖為痛閾出現(xiàn)的指標(biāo)，進(jìn)行小鼠篩選標(biāo)記。再取痛閾值在5 ～ 20S 的合格小鼠50 只，隨機(jī)分為5 組。分別灌胃高、中、低劑量的乳絡(luò)通混懸液( 0. 60g /kg、0. 30g /kg、0. 15g /kg) 、乳康片混懸液( 0. 53g /kg) ，及同體積的生理鹽水。每天灌胃1 次，連續(xù)灌胃3 天，于最后一次灌胃30min 后，在同樣環(huán)境中分別測定它們30min， 60min， 90min， 120min 的痛閾值。
1. 5. 2 乳絡(luò)通對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響取20 ～ 22g的清潔級昆明種雌性小鼠50 只，隨機(jī)分為5 組，分別灌胃乳康片( 0. 53g /kg) ，乳絡(luò)通高、中、低( 0. 60g /kg、0. 30g /kg、0. 15g /kg) 劑量和同體積的生理鹽水。每天灌胃1 次，連續(xù)給藥3 天，于最后一次灌藥1h 后，每鼠左耳滴二甲苯0. 04ml( 正反均滴) ，右耳作為對照，滴加二甲苯1h 后處死動物，取下雙耳，對齊，用0. 8cm 的打孔器打下雙耳耳片。迅速在分析天平上稱重，測腫脹度( 左耳與右耳的質(zhì)量差) 。
1. 5. 3 乳絡(luò)通對大鼠棉球肉芽腫的影響取130 ～ 150g 清潔級Wistar 雌性大鼠50 只，隨機(jī)分為乳絡(luò)通高、中、低劑量( 0.60g /kg、0. 30g /kg、0. 15g /kg) 組，乳康片組( 0. 53g /kg) 和空白對照組( 灌同體積的生理鹽水) 。實驗前禁食不禁水10h。取脫脂棉( 20 ± 0. 5 mg) 60 個，分別稱重，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌1h，90℃烘箱干燥3h。干燥后再次稱重并記錄重量，放入干燥器內(nèi)備用。麻醉大鼠，在無菌操作下埋入后大腿內(nèi)側(cè)腋窩皮下。每天灌胃1 次，連續(xù)灌胃7 天，最后一次給藥1h 后，處死動物，剝離棉球肉芽腫。取出后60℃ 烘干24h，稱重，計算肉芽腫的重量。
1. 5. 4 乳絡(luò)通對小鼠耳廓微循環(huán)的影響取18 ～ 22g 的清潔級昆明種雌性小鼠50 只，隨機(jī)分為乳絡(luò)通高、中、低組( 0. 60g /kg、0. 30g /kg、0. 15g /kg) ，乳康片組( 0. 53g /kg) 和空白對照組( 灌同體積的生理鹽水) 。每天灌胃給藥1 次，連續(xù)灌胃5 天。實驗前每鼠右耳用8% 硫化鈉脫毛，再用溫水洗凈， 24h 后進(jìn)行實驗。末次給藥30min 后，水合氯醛( 3% 0. 15m1 /10g) 腹腔注射麻醉。將小鼠固定在觀察臺上( 耳托上和耳廓表面滴加少許液體石蠟) ，用BZ-2000 型微循環(huán)顯微鏡和微循環(huán)測量分析系統(tǒng)觀察小鼠耳廓微循環(huán)情況。用微量注射器腹腔注射用生理鹽水稀釋( 1: 9) 的鹽酸腎上腺素注射液( 0. 6mg /kg) ，記錄注射前和注射后5、10、20min 小鼠微循環(huán)細(xì)靜脈、細(xì)動脈的管徑和血流速度變化情況。
2 結(jié)果
2. 1 乳絡(luò)通對熱板法致痛小鼠的影響知: 30min 時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的小鼠痛閾值提高較大，與空白對照組比較差別明顯。60min時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的小鼠痛閾提高值較大，與空白對照組比較差別顯著。90min 時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的小鼠痛閾值提高較大，與空白對照組比較差別顯著。120min 時，高、中劑量乳絡(luò)通組的小鼠痛閾值提高較大，與空白對照組比較差別明顯。
2. 2 乳絡(luò)通對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響由表2 可知: 乳康片組，高、中劑量乳絡(luò)通組對小鼠耳廓腫脹有顯著地抑制作用，低劑量乳絡(luò)通組對小鼠耳廓腫脹有明顯地抑制作用，與空白組比較，有明顯差異。
2. 3 乳絡(luò)通對大鼠棉球肉芽腫的影響由表3 可知: 乳康片、高、中劑量乳絡(luò)通組對大鼠棉球肉芽腫有顯著的抑制作用，低劑量乳絡(luò)通組對大鼠棉球肉芽腫有明顯地抑制作用，與空白對照組比較，有明顯差異。
2. 4 乳絡(luò)通對小鼠耳廓微循環(huán)的影響從表4 可知: 在5min 時，高、中劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮較小，與空白對照組比較，差別明顯。而乳康片組和低劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮較大，與空白對照組比較，無顯著差別。在10min 時，乳康片組、高、中劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮較小，與空白對照組比較差別顯著; 而低劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮明顯，與空白對照組比較無顯著差別。在20min 時，乳康片組、高、中劑量乳絡(luò)通組的耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮較小，與空白對照組比較差別顯著( P < 0. 01) ; 而低劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)靜脈管徑收縮明顯，與空白對照組比較無顯著性差別。從表5 可知: 5min 時，各組小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)動脈管徑稍有收縮，無差異。在10min 時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)動脈管徑收縮較小，與空白對照組比較差別顯著。在20min 時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的'小鼠耳廓微循環(huán)細(xì)動脈管徑收縮較小，與空白對照組比較差別顯著。
與空白組比較，在5min 時，各組小鼠耳廓微循環(huán)血流速度有所減小，但無差別。在10min 時，乳康片組、高、中劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)血流速度減少值較小，與空白對照比較，差別顯著。在20min 時，乳康片組、高、中、低劑量乳絡(luò)通組的小鼠耳廓微循環(huán)血流速度減少值較小，與空白對照組比較，差別顯著。
3 討論
乳腺增生病是嚴(yán)重危害女性健康的一種常見疾病、多發(fā)病。中醫(yī)認(rèn)為該病主要由情志不暢，思慮過度，導(dǎo)致肝失舒泄，氣機(jī)不暢，氣滯血瘀，或肝脾不和，痰氣凝滯而成。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為乳腺增生是由性激素代謝紊亂，卵巢內(nèi)分泌功能失調(diào)，雌激素相對或絕對過高而引起，其臨床特征為乳房脹痛、乳房腫塊，一般常于月經(jīng)前期加重，行經(jīng)后減輕。對于該病的治療，中醫(yī)治療原則是以疏肝解郁，理氣止痛，軟堅散結(jié)為主。
乳絡(luò)通主要有香附、丹參、柴胡、白芍、栝樓、路路通六味藥組成，具有理氣化淤、軟堅散結(jié)、消腫止痛的功效，在前期的研究中，我們復(fù)制了大、小鼠乳腺增生模型，觀察了其對乳腺增生的治療作用及其作用機(jī)制。為了更進(jìn)一步驗證該藥的藥效，我們觀察其活血散瘀，消腫止痛的作用。
在本實驗中，我們采用熱板法、二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、大鼠棉球肉芽腫法及小鼠耳廓微循環(huán)法來觀察乳絡(luò)通的鎮(zhèn)痛、抗炎及改善微循環(huán)的作用。結(jié)果顯示乳絡(luò)通能提高小鼠痛閾值，減輕耳廓腫脹的程度，使大鼠棉球肉芽腫的重量減小，能對抗腎上腺素引起的微血管收縮，能擴(kuò)張小鼠耳廓微動脈、微靜脈管徑，改善血液流態(tài)。通過本實驗的研究，乳絡(luò)通具有一定的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。
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