含藍莓花色苷的谷物發酵物抗疲勞作用討論論文
含藍莓花色苷的谷物發酵物( fermented graincontainingblueberry anthocyanins，LH，藍禾) 采用復合酶發酵工藝，含有多種活性成分。國內外研究報道，藍莓花色苷具有抗氧化、抗炎、預防慢性病、提高學習記憶力、改善血管功能及視力等多種生物學功能。但有關其抗疲勞作用的研究未見報道。本實驗觀察藍禾對小鼠運動性疲勞的作用，為開發具有抗疲勞功效的保健食品提供理論基礎。
1 材料與方法
1. 1 實驗動物及處理
雄性、6 ～ 7 周齡、清潔級昆明小鼠80 只，體質量18 ～ 22 g( 軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所動物中心) 。實驗小鼠分2 批進行實驗。
( 1) 第1 批實驗:昆明小鼠隨機分為4 組，即對照組( CN，灌胃蒸餾水17. 5 ml /kg 體質量) 、低( L-LH 8. 75 ml /kg) 、中( MLH17. 5 ml /kg) 、高( H-LH 35. 08 ml /kg) 劑量LH干預組，每組10 只。連續灌胃28 d，測定小鼠負重游泳時間。
( 2) 第2 批實驗: 根據第1 批實驗結果，昆明小鼠隨機分2 組，即對照組( CN，灌胃蒸餾水35. 08 ml /kg) 、高劑量藍禾干預組( H-LH 35. 08 ml /kg) ，每組20 只。連續灌胃28 d，每組隨機抽出10只小鼠測定血乳酸( LA) ; 其余小鼠測定血清尿素氮( BUN) 、肝糖原的含量。各指標具體測定方法參照《保健食品檢驗及評價技術規范》。兩批實驗期間，灌胃1 次/d，每3 d 測小鼠體質量1 次，期間動物自由攝食和飲水。
1. 2 受試物
LH 以藍莓、黑米、江米、黍米等9 種谷物為原料，采用復合酶生物發酵工藝制成，170 ml /罐。藍禾主要營養成分含量( /L) : 能量4950 kJ，蛋白質19. 4 g，碳水化合物170 g，藍莓花色苷400 mg，谷氨酸792. 54 mg /門冬氨酸218. 35 mg、丙氨酸103. 1 mg等17 種氨基酸共1. 67 g，鎂140 mg，鈣10. 7 mg，鐵3. 57 mg，鋅3. 15 mg，銅0. 26 mg，硒6. 1 μg。
1. 3 主要儀器及試劑
超級酶標儀( uQuant，美國) ，高速臺式離心機( 上海安亭科學儀器廠) ，電子天平( 天津天馬衡基儀器有限公司) ，血清尿素氮測定試劑盒、血乳酸測定試劑盒、肝糖原測定試劑盒( 南京建成工程公司) 。
1. 4 方法
1. 4. 1 負重游泳實驗末次給藥30 min 后，將尾根部負荷5%體質量鉛皮的小鼠置于水深40 cm、水溫( 25 ± 1) ℃的游泳缸中游泳，不停攪動水保證小鼠四肢不停地運動，記錄小鼠自游泳開始至力竭( 下沉10 s 不上浮) 的時間。
1. 4. 2 LA 含量測定末次給藥30 min 后，從內眥靜脈叢采血，然后不負重于水深40 cm，水溫30℃的游泳缸中游泳。不停攪動水，保證小鼠四肢不停地運動。游泳10 min 后取出。于停止游泳后0、20 min，內眥靜脈叢采血。按照LA 測定試劑盒要求檢測LA 含量。
1. 4. 3 血清BUN 及肝糖原含量測定末次給藥30 min 后，不負重于水深40 cm、水溫30℃的游泳缸中游泳。不停攪動水以保證小鼠四肢不停地運動。游泳90 min 取出，休息60 min 后摘眼球取血。活殺小鼠，取肝臟，經生理鹽水清洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟100 mg。按照血清BUN、肝糖原測定試劑盒要求測定血清BUN、肝糖原的含量。
1. 5 統計學方法
采用SPSS21. 0 統計軟件進行數據處理分析，結果以珋x ± s 表示。多組計量資料方差齊性采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD 檢驗。兩組比較采用成組設計一元定量資料的t 檢驗。組內比較采用重復測量資料的方差分析。
2 結果
2. 1 藍禾對小鼠體質量變化的影響
在實驗期間，各組小鼠體質量均呈現增長的趨勢，且組間無明顯差異( P > 0. 05) ，提示LH 干預不影響小鼠的正常生長發育。
2. 2 藍禾對小鼠LA 含量的影響
與游泳前比較，對照組小鼠游泳后LA 含量顯著升高( P < 0. 001) ，游泳后20 min 對照組小鼠LA含量較游泳后0 min 顯著降低( P < 0. 001) ，提示游泳可造成小鼠LA 含量的升高，但隨著時間的延長，自身修復機制發揮作用，可下調LA 含量。與對照組比較，H-LH 干預組小鼠游泳后20 min LA 含量呈下降趨勢，但無統計學意義( P > 0. 05) ，提示LH 可促進游泳后LA 的清除。
3 討論
疲勞是機體體力活動達到一定程度后產生的一種自我保護的生理現象。在氧充足條件下，肝糖原分解為葡萄糖進入到血液中提供能量; 而在大強度活動時，機體處于相對低氧的狀態，此時靠無氧糖酵解來提供能量并產生LA。當長時間運動后，蛋白質、氨基酸及其他含氮化合物會被降解，脫下的氨基形成尿素，故機體BUN 含量隨運動負荷的增加而增加。可見肝糖原、LA、BUN 生化指標可反映機體的疲勞程度。黃誠胤等研究發現，與對照組比較，小鼠腹腔注射表沒食子兒茶素沒食子酸酯( EGCG) 28 d 可升高肝糖原的含量，降低血清中LA、BUN 的含量等發揮抗疲勞作用。裴素萍等采用參杞制劑進行抗疲勞實驗得到相同的結論。本研究結果顯示，LH 可提高小鼠的運動耐力( 負重游泳實驗) ，增加小鼠的肝糖原儲備，減少小鼠運動后體內BUN 的含量，提示LH 具有明確的抗疲勞作用。
疲勞的產生是由于能源物質消耗、代謝產物堆積、內環境穩定性失調、自由基影響等原因。自由基的生成是導致運動性疲勞的一個重要因素。機體劇烈運動時，體內氧自由基大量堆積，發生強烈的脂質過氧化反應，破壞生物膜功能，攻擊線粒體，使ATP 的生成量和供給量減少，最終導致疲勞。LH 含有多種清除自由基、抗氧化的活性成分。藍莓花色苷的.分子結構上含有多個酚羥基，可自身氧化釋放電子，直接清除自由基; 另外，其可升高細胞內超氧化物歧化酶和谷胱甘肽轉換酶的活性，減輕氧化應激損傷。李早慧等研究發現藍莓復方咀嚼片可提高小鼠的抗疲勞及耐低氧能力。鋅是多種金屬酶的組成成分或酶的激活劑，如超氧化物歧化酶、蘋果酸脫氫酶、乳酸脫氫酶等，這些酶在抗氧化過程中發揮重要作用; 當細胞產生脂質過氧化損傷時，膜內巰基被氧化成二硫鍵，而鋅與硫穩定的硫醇鹽可防氧化，從而增強膜的穩定性和抗自由基的能力。硒可直接清除自由基; 另一方面，其是谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-PX) 的組成成分，GSH-PX 可清除體內脂質過氧化物，阻斷活性氧和自由基對機體的損傷作用。此外，硒以某種特定形式與細胞膜結合構成膜結合硒而發揮抗氧化作用。有研究表明，鋅及富含硒的食物具有明顯的抗疲勞效應。LH 可能通過此類活性成分，發揮抗疲勞作用，但其作用機制還有待進一步探討。
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