論關(guān)于重樓水提液對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響論文
胃腸動(dòng)力學(xué)異常性疾病發(fā)病率日益增高，而中藥在調(diào)節(jié)和改善胃腸功能方面有著自身的優(yōu)勢(shì)。重樓為百 合 科 植 物 云 南 重 樓 ( Paris polyphylla var.yunnanensis) 的干燥根莖，又 名 七 葉 一 枝 花 ( Parispolyphylla var. chinensis)，以蚤休之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。其主要有效成分為甾體皂苷，并含有氨基酸、甾酮、蛻皮激素、黃酮苷等化合物。重樓藥用歷史悠久，近年來藥理研究表明，該屬植物具有止血、抗腫瘤、抗菌、抗炎等多方面藥理作用。臨床上，應(yīng)用重樓治療的疾病越來越多，重樓是否影響胃腸功能，目前尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為研究對(duì)象，初步探討重樓水取液對(duì)小白鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響。
1 材料與方法
1. 1 試劑 重樓(廣西壯族自治區(qū)百色市市售藥材)，經(jīng)廣西右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光教授鑒定為重樓根莖;活性碳末(廣東臺(tái)山化工廠，批號(hào):940402);羧甲基纖維素鈉(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào):20070708);硫酸阿托品注射液(河南潤(rùn)弘制藥股份有限公司，批號(hào):1104161);鹽酸腎上腺素注射液(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號(hào):100912);新斯的明注射液(鄭州羚銳制藥股份有限公司，批號(hào):1005161)。
1. 2 動(dòng)物 昆明種小鼠 150 只，體質(zhì)量 22 ～ 28 g，雌雄不限，由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(桂)2003-0003。
1. 3 儀器 ARII40/C 電子天平(奧毫斯，上海公司生產(chǎn))。
1. 4 重樓水提液的制備 稱取重樓飲片 50 g，加入10 倍量水(500 mL)常溫浸泡18 h，大火煮沸后慢火煎煮1 h，過濾留下濾液，取濾渣再加水500 mL 煮沸后慢火煎煮1 h，過濾棄濾渣，合并兩次濾液用16 層紗布過濾，隔水蒸發(fā)濃縮，定容為 1 g·mL-1 ，冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。
1. 5 碳末懸液的制備 稱取活性碳末 5 g、羧甲基纖維素鈉 1 g 溶于 100 mL 雙蒸水中，攪拌均勻配制成碳末懸液，冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。
1. 6 對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響 取30 只小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分 3 組，即重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )，重樓水提液高劑量組(5. 0 g·kg-1 )和正常對(duì)照組，每組 10 只。灌胃給藥前，小鼠禁食12 h，每組小鼠均按每千克體質(zhì)量劑量灌胃給藥，對(duì)照組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥 30 min 后，再以5%碳末懸液 0. 25 mL·(10 g)-1灌胃給藥。20 min后，將小鼠處死，打開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，取出胃，用濾紙吸干后稱質(zhì)量，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物，再用濾紙吸干，稱胃凈質(zhì)量。計(jì)算胃內(nèi)容物殘留率(%) = [(胃全質(zhì)量 - 胃凈質(zhì)量) /半固體米糊]×100% 。以胃內(nèi)容物殘留率為指標(biāo)評(píng)價(jià)胃排空速度。同時(shí)取出小腸自然平鋪于桌面上，將小腸擺成直線并測(cè)量，以幽門至回盲部的距離作為“小腸總長(zhǎng)度”，以幽門至炭末推進(jìn)前端的距離作為“炭末推進(jìn)距離”。用下列公式計(jì)算炭末推進(jìn)百分比:炭末推進(jìn)比(%) = 炭末在小腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸總長(zhǎng)度 ×100%。以炭末推進(jìn)比為指標(biāo)評(píng)價(jià)小腸推進(jìn)速度。
1. 7 對(duì)阿托品所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)抑制的影響 取小鼠 40 只，隨機(jī)分成 4 組，即正常對(duì)照組、單純阿托品組(0. 5 mg·kg-1 )、阿托品 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、阿托品 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項(xiàng)，正常對(duì)照組和阿托品組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥的同時(shí)正常對(duì)照組肌內(nèi)注射等體積雙蒸水，其余各組小鼠均按 0. 5 mg·kg-1 肌內(nèi)注射阿托品，注射給藥30 min后，操作方法及計(jì)算方法按“1. 6”項(xiàng)進(jìn)行。
1. 8 對(duì)腎上腺素所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)抑制的影響 取小鼠 40 只，隨機(jī)分成 4 組，即正常對(duì)照組、單純腎上腺素組(0. 3 mg·kg-1 )、腎上腺素 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、腎上腺素 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項(xiàng)，正常對(duì)照組和腎上腺素組給予等體積雙蒸水。灌胃給藥的同時(shí)正常對(duì)照組肌內(nèi)注射等體積雙蒸水，其余各組小鼠均按 0. 3 mg·kg-1 肌內(nèi)注射腎上腺素，注射給藥30 min后，操作方法及計(jì)算方法按“1. 6”項(xiàng)進(jìn)行。
1. 9 對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響 取小鼠 40 只，隨機(jī)分成 4 組，即新斯的`明組(0. 125 mg·kg-1 )、新斯的明 + 重樓水提液低劑量組(2. 5 g·kg-1 )、新斯的明 + 重樓水提液高劑量組(5 g·kg-1 )、和正常對(duì)照組，每組 10 只 。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食 12 h，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組的給藥劑量和方法同“1. 6”項(xiàng)，對(duì)照組給予等體積雙蒸水。新斯的明組、新斯的明 + 重樓水提液低劑量組、新斯的明+ 重樓水提液高劑量組在灌胃給藥的同時(shí)均按0. 125 mg·kg-1 肌內(nèi)注射新斯的明，正常對(duì)照組肌內(nèi)注射等體積雙蒸水。注射給藥 30 min 后，操作方法及計(jì)算方法按“1. 6”項(xiàng)進(jìn)行。1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 13. 0 版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(x ± s)表示，采用單因素方差分析，P<0. 05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響 結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組的胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2. 2 對(duì)阿托品所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)抑制的影響 結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，阿托品組的胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與阿托品組比較，重樓水提液低劑量組的小腸推進(jìn)率和重樓水提液高劑量組的胃內(nèi)殘留率均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2. 3 對(duì)腎上腺素所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)抑制的影響 結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，腎上腺素組的胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與腎上腺素組比較，重樓水提液低劑量組的小腸推進(jìn)率和重樓水提液高劑量組的胃內(nèi)殘留率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表 3。2. 4 對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空和小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響 結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，新斯的明組的胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與新斯的明組比較，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組的胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 討論
3.1 胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)因素 胃腸運(yùn)動(dòng)主要由神經(jīng)、體液因素進(jìn)行調(diào)節(jié)。神經(jīng)調(diào)節(jié)包括交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)和存在腸壁內(nèi)的腸神經(jīng)系統(tǒng) 。交感神經(jīng)神經(jīng)末梢通過釋放去甲腎上腺素，作用于胃腸道平滑肌細(xì)胞膜上的腎上腺素能受體，而抑制胃腸運(yùn)動(dòng)。副交感神經(jīng)末梢通過釋放乙酰膽堿，作用于胃腸道平滑肌細(xì)胞膜上的 M 受體，而促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)。胃腸道上主要存在膽堿能 M 受體、腎上腺素 α 和 β 受體、組胺受體及多種胃腸激素受體。體液因素主要是胃腸激素的調(diào)節(jié)，胃腸激素種類較多，不同的胃腸激素，對(duì)胃腸活動(dòng)產(chǎn)生不同的效應(yīng)。
3. 2 重樓水提液對(duì)正常小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響實(shí)驗(yàn)表明，重樓水提液低劑量組有促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)作用，重樓水提液高劑量組有抑制小鼠小腸推進(jìn)作用，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組均有抑制小鼠胃排空的作用。此結(jié)果提示，在完整的神經(jīng)體液因素調(diào)節(jié)下，不同劑量的重樓水提液對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)功能表現(xiàn)不一;但均能抑制正常小鼠胃排空功能，這可能與腸道活動(dòng)比胃活動(dòng)更復(fù)雜性有關(guān)。
3. 3 重樓水提液對(duì)膽堿能系統(tǒng)的影響 新斯的明為可逆性的抗膽堿酯酶藥物 ，使膽堿能神經(jīng)末梢釋放的乙酰膽堿破壞減少，突觸間隙中乙酰膽堿積聚，具有興奮膽堿能 M 受體的作用。實(shí)驗(yàn)表明，重樓水提液高、低兩個(gè)劑量組均有拮抗新斯的明，抑制小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的作用。此結(jié)果提示，重樓水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)抑制作用可能與阻斷 M 膽堿能受體有關(guān)。阿托品是臨床上常用的一種 M 受體拮抗藥，通過阻斷 M 膽堿能受體，使副交感神經(jīng)抑制，導(dǎo)致胃腸平滑肌松，小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)減慢，臨床上常用于胃腸痙攣等疾病的治療。實(shí)驗(yàn)表明，重樓水提液低劑量組有拮抗阿托品，促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)的作用，而重樓水提液高劑量組有協(xié)同阿托品，抑制小鼠胃排空的作用。此結(jié)果提示，重樓水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響可能不是單純與阻斷M 膽堿能受體有關(guān)。
3. 4 重樓水提液對(duì)腎上腺素能系統(tǒng)的影響 支配胃腸的交感神經(jīng)屬于腎上腺素能神經(jīng)，其末梢通過釋放去甲腎上腺素，作用于胃腸道平滑肌細(xì)胞膜上的腎上腺素能受體，而抑制胃腸運(yùn)動(dòng)。實(shí)驗(yàn)表明，重樓水提液低劑量組有拮抗腎上腺素，促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)的作用，而重樓水提液高劑量組有協(xié)同腎上腺素，抑制小鼠胃排空的作用。此結(jié)果提示，重樓水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響可能與腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)。綜上所述，重樓水提液可抑制胃運(yùn)動(dòng)，具有解除胃痙攣的作用，對(duì)于小腸運(yùn)動(dòng)，則不同的劑量產(chǎn)生不同的效應(yīng)。因此，筆者推測(cè)重樓水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響除了與 M 膽堿能受體、腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)外;也可能是由于中草藥成分復(fù)雜，胃腸機(jī)能狀態(tài)存在差異，對(duì)藥物中不同成分具有不同的反應(yīng)結(jié)果;其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。本實(shí)驗(yàn)對(duì)治療胃痙攣、腸功能紊亂等疾病提供一定的藥理理論基礎(chǔ)。
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