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elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告

時(shí)間:2025-01-23 10:35:40 銀鳳 報(bào)告 我要投稿
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elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文(通用7篇)

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elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文(通用7篇)

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1

  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模豪?ELISA 技術(shù)檢測(cè)樣本中是否存在特定病毒抗原,以輔助疾病診斷。

  實(shí)驗(yàn)材料:待檢樣本、病毒抗原特異性抗體、酶標(biāo)二抗、底物顯色液、ELISA 試劑盒配套試劑與耗材。

  實(shí)驗(yàn)步驟:首先對(duì) ELISA 板進(jìn)行包被,將捕獲抗體固定在板孔表面;然后加入待檢樣本,孵育使抗原與抗體結(jié)合;洗滌后加入酶標(biāo)二抗,再次孵育并洗滌;最后加入底物顯色液,根據(jù)顏色變化判斷結(jié)果。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:部分樣本孔出現(xiàn)明顯顯色反應(yīng),通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比,初步判斷這些樣本中存在目標(biāo)病毒抗原。

  實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:本次實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程規(guī)范,但在樣本處理環(huán)節(jié)可能存在個(gè)別樣本交叉污染情況。結(jié)果表明 ELISA 技術(shù)能夠有效檢測(cè)出樣本中的病毒抗原,為疾病診斷提供了有力依據(jù),但需進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程以減少誤差。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2

  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模哼\(yùn)用 ELISA 方法檢測(cè)食品中是否含有常見過(guò)敏原抗原,保障食品安全。

  實(shí)驗(yàn)材料:各類食品樣本、過(guò)敏原特異性抗體、酶結(jié)合物、終止液等。

  實(shí)驗(yàn)步驟:依次進(jìn)行包被、封閉、加樣、孵育、洗滌、加酶標(biāo)二抗、孵育洗滌、加底物顯色及終止反應(yīng)等步驟。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在幾種堅(jiān)果類食品樣本中檢測(cè)到了相應(yīng)的.過(guò)敏原抗原,而其他食品樣本未出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。

  實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格控制了溫度和時(shí)間等條件,但在洗滌步驟中可能存在洗滌不徹底的問(wèn)題。結(jié)果說(shuō)明 ELISA 可用于食品過(guò)敏原檢測(cè),對(duì)于預(yù)防食物過(guò)敏事件具有重要意義,后續(xù)需改進(jìn)洗滌操作以提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 3

  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模翰捎?ELISA 技術(shù)檢測(cè)植物組織樣本中是否存在特定病原菌抗原,為植物病害防治提供依據(jù)。

  實(shí)驗(yàn)材料:患病植物組織提取液、病原菌特異性抗體、羊抗兔 IgG-HRP 等。

  實(shí)驗(yàn)步驟:ELISA 板包被抗體后,加入植物組織提取液,后續(xù)按常規(guī) ELISA 流程進(jìn)行操作。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在表現(xiàn)出明顯病害癥狀的植物樣本中檢測(cè)到了病原菌抗原,健康植物樣本為陰性。

  實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中樣本提取可能存在雜質(zhì)殘留影響結(jié)果。ELISA 可用于快速檢測(cè)植物病原菌抗原,對(duì)于及時(shí)發(fā)現(xiàn)和防治植物病害具有重要價(jià)值,后續(xù)實(shí)驗(yàn)需優(yōu)化樣本提取方法。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 4

  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模豪?ELISA 檢測(cè)動(dòng)物血清樣本中特定疫病抗原,輔助動(dòng)物疫病診斷與防控。

  實(shí)驗(yàn)材料:動(dòng)物血清、疫病抗原特異性抗體、TMB 底物溶液等。

  實(shí)驗(yàn)步驟:標(biāo)準(zhǔn)的 ELISA 操作流程,包括包被、加樣、孵育、洗滌、加酶標(biāo)抗體、顯色等。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:部分養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的動(dòng)物血清樣本呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),表明這些動(dòng)物可能感染了目標(biāo)疫病。

  實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:實(shí)驗(yàn)中存在不同批次試劑可能導(dǎo)致的`誤差。結(jié)果顯示 ELISA 在動(dòng)物疫病抗原檢測(cè)方面具有良好的應(yīng)用前景,但需對(duì)試劑質(zhì)量進(jìn)行更嚴(yán)格把控,以提高檢測(cè)的可靠性。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 5

  實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò) ELISA 技術(shù)測(cè)定生物制品中目標(biāo)抗原的'含量,確保產(chǎn)品質(zhì)量。

  實(shí)驗(yàn)材料:生物制品樣本、已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品、抗該抗原的單克隆抗體等。

  實(shí)驗(yàn)步驟:先制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后對(duì)生物制品樣本進(jìn)行稀釋后加樣,按照 ELISA 常規(guī)步驟操作。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出生物制品樣本中抗原的含量,與產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比,判斷是否符合要求。

  實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中樣本稀釋倍數(shù)的準(zhǔn)確性對(duì)結(jié)果影響較大。結(jié)果表明 ELISA 可用于生物制品抗原含量測(cè)定,為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供了有效手段,后續(xù)需更精確地控制樣本稀釋過(guò)程。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 6

  一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡(jiǎn)稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù),ELISA過(guò)程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測(cè)抗體(抗原), 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測(cè)抗體(抗原)--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體(抗原)的量。待測(cè)抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)生成正比。

  二.實(shí)驗(yàn)原理

  用于免疫酶技術(shù)的酶有很多,如過(guò)氧化物酶,堿性磷酸酯酶,β-D-半乳糖苷酶,葡萄糖氧化酶,碳酸酐酶,乙酰膽堿酯酶,6-磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過(guò)氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過(guò)氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng),在呈色后須立刻測(cè)定,否則空氣中的氧化作用使顏色加深,無(wú)法準(zhǔn)確地定量。

  辣根過(guò)氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白,每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的最大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm,所以酶的濃度和純度計(jì)算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Reinheit Zahl)值越大說(shuō)明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右,最高可達(dá)3.4。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上。

  ELISA的基本原理有三條:

  (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;

  (2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

  (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。

  ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體,而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個(gè)方面:

  1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

  2、研究抗酶抗體的合成。

  3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

  4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。

  基本方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

  1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

  基本方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法:

  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。 ↓

  加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照) ↓

  于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 ↓

  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

  (二) 酶與底物

  酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的'產(chǎn)物。是ELISA成敗的關(guān)鍵試劑,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng),還具有酶促反應(yīng),顯示出生物放大作用,但不同的酶選用不同的底物。

  免疫技術(shù)常用的酶及其底物

  * 終止劑為2mol/L H2SO4

  ** 終止劑為2 mol/L檸檬酸, 不同的底物有不同的終止劑。

  可催化下列反應(yīng): HRP+H2O2→復(fù)合物 復(fù)合物+AH2→過(guò)氧化物酶+H2O+A AH2 ——為無(wú)色底物, 供氫體; A—— 為有色產(chǎn)物。

  (三) ELISA常用的四種方法

  1.直接法測(cè)定抗原 將抗原吸附在載體表面;

  加酶標(biāo)抗體,形成抗原—抗體復(fù)合物; 加底物。底物的降解量=抗原量。

  2.間接法測(cè)定抗體

  將抗原吸附于固相載體表面; 加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物; 加酶標(biāo)抗體;

  加底物。 測(cè)定底物的降解量=抗體量。

  3.雙抗體夾心法測(cè)定抗原

  將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;

  加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體); 加底物。底物的降解量=抗原量。

  4. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原

  將抗體吸附在固相載體表面;

  (1) 加入酶標(biāo)抗原;

  (2),(3)加入酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原;

  加底物。對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量。

  elisa測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)報(bào)告 7

  入校新生;谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT);乙肝表面抗原(HBsAg)

  肝功能檢查是診斷肝炎的主要指標(biāo),國(guó)內(nèi)獻(xiàn)血員篩選仍以乙肝表面抗原(HBsAg)的檢測(cè)為依據(jù)[1]。HBsAg是HBV感染的特異性指標(biāo)。大學(xué)生多集體生活,易造成肝炎的流行。每年對(duì)入校新生的肝功能檢查和HBsAg的檢測(cè)是很必要的,為此,我們對(duì)入校新生集體組織抽血檢查,現(xiàn)將2003年、2004年入校新生檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

  1一般資料

  11對(duì)象

  研究對(duì)象是2003年全部入校新生3698人,其中男生1420人,女生2278人。2004年全部入校新生4377人,男生1805人,女生2572人。年齡18~22歲,所有的標(biāo)本為空腹靜脈血,并于24h內(nèi)分離血清。

  12儀器與方法

  用反向被動(dòng)血凝試驗(yàn)測(cè)定HBsAg,谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)用賴氏法測(cè)定[2]。使用上海榮盛生物技術(shù)公司生產(chǎn)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒,用廈門分析儀器廠生產(chǎn)的721分光光度計(jì)比色,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出谷丙轉(zhuǎn)氨酶的單位。

  2結(jié)果

  檢測(cè)結(jié)果見表1,表2。由表1,表2可以看出,我校2003年入校新生中HBsAg攜帶者31人,其攜帶率為084%(31/3698),其中女生13人,攜帶率057%(13/2278),男生18人,攜帶率127%(18/1420);GPT>80U/L3人,異常率為008%由表1,表2還可看出無(wú)論是2003年新生還是2004年新生,男生HBsAg攜帶率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女生。表12003年入校新生HBsAg攜帶率及GPT異常率的檢測(cè)結(jié)果(略)表22004年入校新生HBsAg攜帶率及GPT異常率的檢測(cè)結(jié)果(略)

  3討論

  資料顯示,我校新生HBsAg攜帶率2003年為084%,2004年為067%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于我省HBsAg攜帶率(我省HBsAg攜帶率一般在7%左右)。男生的HBsAg攜帶率高于女生的原因,我們認(rèn)為可能與生活方式有關(guān),如男生喜歡幾個(gè)人聚在一起吃飯、喝酒,而女生卻很少有這種愛(ài)好,所以肝炎在男生中傳播的機(jī)率就大一點(diǎn)。雖然我校學(xué)生HBsAg攜帶率偏低,但是也不能忽視,我國(guó)是乙型肝炎病毒(HBV)感染高發(fā)區(qū),大約有98%的人攜帶乙肝病毒,每年有30萬(wàn)人死于與乙肝有關(guān)的肝癌及肝硬化。因此,對(duì)正常的學(xué)生做好乙肝疫苗的接種,杜絕乙肝的傳播是很重要的。有報(bào)道820例幼兒接種乙肝疫苗后產(chǎn)生的免疫應(yīng)答率為99268%,接種效果高于國(guó)內(nèi)9677%的.報(bào)道[3]。對(duì)于HBsAg攜帶者和GPT增高者,做好早發(fā)現(xiàn)、早治療。病毒性肝炎已成為威脅人們健康的嚴(yán)重疾病,做好乙肝疫苗的接種,對(duì)學(xué)生進(jìn)行乙肝知識(shí)的培訓(xùn),讓他們了解乙肝的傳播途徑和預(yù)防措施,養(yǎng)成良好的生活習(xí)慣,加強(qiáng)自我保護(hù)意識(shí)。

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